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答案:PCR的中文全称为聚合酶链反应。PCR的工作原理是以待扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5'末端和3'末端相互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制,沿着模板链延伸合成新的DNA链,即可使目的DNA片段得到上百万倍的扩增。
PCR的基本反应步骤如下。①变性:将反应系统加热至95℃,使模板DNA完全变性成为单链,同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除。②退火:将温度下降至适宜温度,使引物与模板DNA退火结合。③延伸:将温度升至72℃,DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述三步构成一个循环,新合成的DNA分子继续作为下一轮合成的模板,经多次循环(20~30次)后,即可达到扩增DNA片段的目的。
PCR即聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction)的缩写,它是体外酶促合成特异DNA片段的方法。这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物,在含有引物、待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系中DNA复制反复进行,在短时间内可以取得大量扩增产物。其原理是寡聚核苷酸链引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸,合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物,在体外进行靶DNA的重复合成。
主要的技术步骤是:
(1)DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。
(2)引物与靶DNA退火 适当降低温度,使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。
(3)引物延伸 在DNA聚合酶的催化下,引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后,又可作为模板与引物杂交,并且在DNA聚合酶的催化下,引导合成新的靶DNA链。如此反复进行以上3个步骤,即可使靶DNA片段指数性扩增。
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